“基因敲除狗”,“基因敲除猪”,CRISPR/Cas9到底是怎样一个技术
近日，中国科学家利用基因编辑技术——CRISPR/Cas9，对抑制狗骨骼肌生长的基因（MSTN）进行了敲除，培育出两只肌肉发达的“大力神”狗，成功构建了世界首个基因敲除狗模型。
CRISPR-Cas9，一种基因治疗法，这种方法能够通过DNA剪接技术治疗多种疾病。2017年3月，英国《自然·通讯》杂志发表一项遗传学重要研究成果，利用CRISPR-Cas9系统可拯救失明小鼠。
CRISPR-Cas9基因编辑技术就是通过人工设计的 sgRNA（guide RNA）来识别目的基因组序列，并引导 Cas9 蛋白酶进行有效切割 DNA 双链，形成双链断裂，损伤后修复会造成基因敲除或敲入等，最终达到对基因组DNA 进行修饰的目的。
基因敲除（Knock-out）Cas9可以对靶基因组进行剪切，形成DNA的双链断裂。在通常情况下，细胞会***用高效的非同源末端连接方式（NHEJ）对断裂的DNA进行修复。
用cas9基因敲除不同转录本怎么设计grna
打开一个pSpCas9质粒--actin--restriction cloning--insert fragment （2）在Vector选项卡，选择内切酶为BbsI，在insert部分选择上一步中保存好的oligo，最后点击clone，保存DNA文件。
有两种修复切口的方法：主要有2个使用方法：一个载体上2个gRNA的例子。几乎每种微生物都有自己的Cas9版本，大小和序列都不一样。切割效率也不一样。体内测试切割效率。
Cas9可以同时对对个目的基因进行编辑，只要联合使用相应的sgRNA即可。我放英文原文的原因是：要么这里很重要，担心自己的理解不能完全阐明；要么就是，这里不是那么重要，放出来看看就行。
基因编辑技术是什么?它是如何在医学领域应用的?
基因编辑技术是指通过人工手段对生物体（包括动物、植物和微生物等）的基因组进行精确操作，对特定基因进行删除、替换或添加等操作，以达到改变生物体性状的目的。这种技术在生物学、医学、农业等领域具有广泛的应用前景。
基因编辑技术是基因工程技术，也可以称为基因组编辑技术、基因组工程技术等等。通过对生物体基因组中某些特定的目标的基因加以修饰，从而让它基因变得更完善。它是一种新兴的技术，未来的发展潜力非常大。
基因编辑什么意思基因编辑，又称基因组编辑或基因组工程，是一种新兴的比较精确的能对生物体基因组特定目标基因进行修饰的一种基因工程技术。基因编辑技术指能够让人类对目标基因进行定点“编辑”，实现对特定DNA片段的修饰。
就是在基因水平上进行编辑，使生物带上人类需要的性状。主要用于基因病的治疗，基因药物的研发，动植物的品种改良，生物新品种的研发，生化物质的生产等方面。
基因编辑的应用： 在医学上用于治疗基因遗传病 CRISPR介导的“基因组编辑”技术为在细胞中实现更多的遗传应用打开了一扇大门，可促使科学家及医疗人员更好地了解人类疾病及其潜在疗法。
设计gRNA时为什么AT值要高一点
不对。变性作用是指核酸双螺旋结构被破坏，双链解开，但共价键并未断裂，热变性一半时的温度称为熔点或变性温度，以Tm来表示，DNA的GC含量影响Tm值，GC含量高则Tm高。
可以让引物序列稍微长一点，这样你的Tm值会高一点，方便你特异扩增。
手自一体（AT）：目前市场化最成熟、生产规模最大的变速箱，目前最多为10个档位10at（本田）但是最多的还是8at或9at，其优点是动力传递直接、成熟可靠、平顺（相对）。
CRISPR/Cas9结合纳米医学治疗宫颈病变——治疗HPV感染新思路
文章中报道他们开发了由非***载体PBAE546和靶向HPV16 E7的CRISPR/Cas9重组质粒组成的纳米颗粒（NPs），用于治疗HPV感染和相关宫颈恶性肿瘤。
只要人体免疫力正常，8~12个月内就能自己清除***。hpv没有特效药，目前所做的治疗只是通过消炎、提升免疫力，来破坏***生存的环境，达到消灭它的目的。
HPV感染怎么治疗对于没有肉眼或病理学证实的病灶，是根本不需要治疗的。换言之，只有当出现了肉眼可见病灶（如***）或者病理证实有病变发生（如CIN），才需要治疗。
目前我科新开展的宫颈HPVE6/E7 mRNA检测技术，可及时发现宫颈HPV***感染，而非一过***染可能，减轻患者经济及心理负担，避免过度诊断和治疗给病人造成的恐慌。
不过为了预防宫颈癌的发生，此时的治疗是非常有必要的，阻断宫颈癌变的关键在于阻断高危型HPV持续感染，所以建议您治病从病根入手，针对HPV***进行治疗。
CRISPR/Cas9指南
这篇指南将提供CRISPR/Cas9生物学方面的概览，介绍CRISPR的不同应用，帮助诸位在各自领域上开展CRISPR/Cas9的研究。通过靶向基因特异的gRNA和核酸内切酶Cas9的共表达，CRSIPR/Cas9可用于产生敲除细胞或敲除动物。
对于CRISPR-Cas9的作用机理可以分为三个阶段来理解。
CRISPRCas9靶向基因组编辑系统有两个组成部分： 内切核酸酶-Cas9 和 指导RNA-gRNA 。内切核酸酶是来自酿脓链球菌的Cas9核酸酶蛋白。
CRISPR-Cas9是继ZFN、TALENs等基因编辑技术推出后的第三代基因编辑技术，短短几年内，CRISPR-Cas9技术风靡全球， 成为现有基因编辑和基因修饰里面效率最高、最简便、成本最低、最容易上手的技术之一，成为当今最主流的基因编辑系统。
Cong， L.等人[1]在不影响系统效率的情况下，将crRNA和tracrRNA融合为一条RNA。通过这种简化，CRISPR/Cas9系统现仅包括两个元素：Cas9蛋白和sgRNA（single guide RNA）。因此现在人们将CRISPR/Cas9技术也称为Cas9/sgRNA技术。