求助怎么设计mirna引物及探针
miRNA可以设计茎环引物反转录，用探针法或者染料法检测。
首先，为你的miRNA 3-端最后6个碱基写一段完全互补的序列，然后接在一段固定的茎环结构模板序列上，就完成了。
不同的茎环序列会有差异，主要有2种，一种有探针的结合位点，可以用探针法检测，一种没有探针的结合位点。如果用茎环法检测miRNA，建议使用茎环法。
而我们对某种的microRNA的表达检测的对象是成熟体，microRNA的成熟体长度约为19-25nt，由于其序列和性质的特殊性，我们需要使用与普通mRNA不同的方法对其进行引物的设计。
上游引物一般是根据miRNA的序列设计，在序列前面加上一个tag，以调整tm值，自己没把握的话，可直接让生物公司给设计，***：//haigene.cn/microrna_cdna_kit.html，我在他家设计过，效果还可以。
上游引物不能全覆盖miRNA，5‘-增加几个碱基后Tm值和下游引物相对应，可以再用软件检查，避免非特异性结合 一般自己设计这种miRNA的RT-PCR引物需要不断优化，一次成功的机会较小，要做好心理准备。
microRNA茎环引物如何设计的?最好能有实例举证,非常感谢!
一般自己设计这种miRNA的RT-PCR引物需要不断优化，一次成功的机会较小，要做好心理准备。
首先，为你的miRNA 3-端最后6个碱基写一段完全互补的序列，然后接在一段固定的茎环结构模板序列上，就完成了。
实验的第一步，应是在样品中加入你的引物，准备退火。但退火之前必然有一个95度变性，然后退火。否则，样品中的miRNA可能有二级结构，不能以单链形式与你的引物互补，那就检测不到了。
microRNA的茎环引物可以自己设计。据说有公司也可以帮忙合成，不过还是自己设计好了发过去比较省钱吧。内参一般是U6，因为它长度和microRNA一样比较短。
而我们对某种的microRNA的表达检测的对象是成熟体，microRNA的成熟体长度约为19-25nt，由于其序列和性质的特殊性，我们需要使用与普通mRNA不同的方法对其进行引物的设计。
这个和普通的反转录pcr一样啊，反转录成cDNA第一链，单链再做pcr扩增，逆向引物当然是和反转录引物部分相同，而不是互补咯。
mirbase数据库怎么引物设计
1、引物设计的实质：一小段单链DNA或RNA，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链。
2、特异性：引物最好在模板cDNA的保守区内设计。引物应与核酸序列数据库的其他序列无明显同源性，不应有连续8个碱基与待扩增区外序列完全互补。可对其进行BLAST检测进行验证。
3、以下是引物设计的一般步骤： 确定扩增区域：首先需要明确要扩增哪个DNA区域，例如基因的外显子、内含子或启动子等。 收集序列信息：从数据库中获取该区域的序列信息，如NCBI等公共数据库。
targetscan预测结果怎么看
1、只是找交集的话excel就可以吧：先对靶基因排序，然后执行函数“=if（A1=A2，same，）”就可以看到哪些基因被多次预测。 R语言里的Venn package则可以快速计各个结果相互之间的overlap情况。
2、到底是简单说明还是详细说明啊……打开targetscan，输入对应物种和mir，然后提交，就能找到对应的靶点。
3、你都没看什么文献吧。miRNA一般与靶基因的3UTR区结合。当匹配紧密的时候，miRNA与RISC形成沉默复合物，降解mRNA。匹配不完全的时候，起到的是翻译抑制的作用。植物体内miRNA的主要是通过降解mRNA来实现的。
如何预测和鉴定miRNA的靶基因
1、鉴定miRNA靶基因的最常用方法是依赖计算机算法，如TargetScan、MiRanda和PicTar。它们预测miRNA***区的结合。
2、靶基因的验证 预测终归是预测，miRNA的靶基因还必须经过验证。这个过程与一开始寻找靶基因的过程相似，也就是抑制或过表达miRNA，然后检查mRNA或蛋白水平的反应。
3、-UTR，通过抑制翻译起始来调控基因表达。据此可以设计，你过表达这个miRNA，那么它的靶基因应该是mRNA不怎么变，但翻译中mRNA明显下调。符合这一特征的即很有可能是miRNA的直接靶点。再结合软件判断，一般就可以很精准了。
4、miRNA结合到靶基因的3UTR区域，可能会导致Luciferase基因表达抑制，进而通过测量Luciferase活性来确定miRNA和靶基因之间的互作关系。RNA干扰（RNAi）：利用siRNA或shRNA技术，靶向特定miRNA或靶基因进行敲除或沉默。